По материалам статьи «Случай рождения здорового ребенка при дозревании ооцитов, полученных на стадии GV».

В настоящее время помимо классического протокола контролируемой стимуляции яичников с целью получить пригодные для оплодотворения ооциты метафазы второго мейотического деления, которые обозначаются как MII или М2 и называются «зрелыми», разрабатывают альтернативные подходы получения «незрелых» яйцеклеток с последующим их дозреванием в условиях in vitro. «Незрелыми» яйцеклетками считают ооциты метафазы первого мейотического деления (М1 или MI), а также предшествующей этой стадии — ооциты в стадии, так называемого, «зародышевого пузырька» (GV, от англ. germinal vesicle — герминальный везикул). Получение ооцитов именно на стадии GV без гормональной стимуляции или минимальными дозами препаратов представляет собой хорошую альтернативу, а иногда и единственную, обычной стимуляции яичников для пациентов с высоким риском развития синдрома гиперстимуляции яичников, синдромом поликистозных яичников (СПКЯ), слабым ответом яичников и онкологией. Дозревание in vitro полученных ооцитов на стадии GV (IVM, от англ. In Vitro Maturation) возможно двумя альтернативными способами: путем одностадийной инкубации ооцитов, окруженных клетками кумулюса, в специальных условиях и добавлением различных гормональных добавок и факторов роста, а также в два этапа с предварительной инкубацией ооцитов в присутствии натрийуретического пептида С-типа (CNP, от англ. C-type natriuretic peptide). Данный протокол дозревания ооцитов называется OTO IVM (от англ. In Vitro Maturation of Ovarian Tissue Oocytes), его использование позволяет синхронизировать созревание ядра и цитоплазмы. Использование подхода OTO IVM эффективнее подготавливает яйцеклетку к оплодотворению или криоконсервации, что особенно актуально при онкологических заболеваниях, при которых стимуляция яичников невозможна.

Одной из особенностей подхода получения ооцитов на стадии GV является отсутствие триггера созревания ооцитов, который в стандартных протоколах контролируемой стимуляции овуляции яичников вводят за 36-38 ч до пункции. Хороший выход при стандартной стимуляции считается получение 75–90% ооцитов в стадии MII, остальная часть клеток может оказаться «незрелыми» (на стадии MI и/или GV) или дегенеративными. Однако случается, особенно при небольшом количестве пунктируемых фолликулов, что полученные клетки оказываются все «незрелыми». Тогда могут применяться «спасительные» методы, характеризующиеся низкой эффективностью, но дающие шанс. Так, в статье 2019 года приводится клинический случай рождения здорового ребенка из полученного ооцита на стадии GV, который дозрел в условиях in vitro.

«Победной» попыткой для пары пациентов оказался девятый протокол. В первый протокол пара вступала в возрасте 31 года партнерши с лапароскопической двусторонней резекцией правого и левого яичников по поводу эндометриоидных кист и миомой матки малых размеров в анамнезе. Причинами неудач предыдущих попыток стали неудачные переносы эмбрионов как свежем, так и криоцикле, неполучение ооцитов во время пункции, неудача в оплодотворении или неправильное оплодотворение, а также получение эмбрионов плохого качества. Стоит отметить, что из-за хирургического вмешательства на яичниках у пациентки был крайне снижен овариальный резерв, в результате чего во всех восьми попытках из 1-3 фолликулов получали не более 1 ооцита. При девятой «победной» попытке во время пункции двух фолликулов получили два ооцита, однако оба ооцита оказались «незрелыми» — в стадии GV, и было принято решение рассмотреть возможность оплодотворения на следующие сутки. В результате инкубации в специальной среде ооциты к следующему утру дозрели до стадии MII, в результате чего произвели оплодотворение методом ПИКСИ (PICSI, от англ. Physiologic Intra Cytoplasmic Sperm Injection) — модифицированный метод ИКСИ, который дополнительно позволяет отобрать «зрелые» сперматозоиды по их способности связываться с гиалуронатом ввиду снижения показателей спермограммы (объем эякулята — 2 мл, концентрация сперматозоидов — 30 млн/мл, прогрессивно подвижных — 24%, морфологически нормальных форм — 3%) у партнера. Оба ооцита успешно оплодотворились, и из обеих зигот выросли бластоцисты отличного качества 4АА (по классификации д-ру Дэвида Гарднера) на 5 сутки, которые криоконсервировали. Одна из бластоцист была перенесена в рамках криопротокола на фоне заместительной гормональной терапии (ЗГТ) с последующей поддержкой лютеиновой фазы. В результате переноса наступила беременность, которая завершилась своевременными оперативными родами в сроке 37 недель здоровым плодом мужского пола с массой тела 2860 г и длиной — 50 см, оценка по шкале Апгар составила 8-9 баллов. На момент написания статьи малышу было 4 месяца, и его развитие соответствовало возрасту.

Источники:

• Киселева Ю. Ю., Казначеева Т. В., Фармаковская М. Ф., Елагин В. В., Кириллова А. О. Случай рождения здорового ребенка при дозревании ооцитов, полученных на стадии GV. Проблемы репродукции. 2019; 25(4): 84-88.
• The Vienna consensus: report of an expert meeting on the development of ART laboratory performance indicators, Reproductive BioMedicine Online, Volume 35, Issue 5, 2017, Pages 494-510, ISSN 1472-6483.
• Kirillova A, Bunyaeva E, Van Ranst H, Khabas G, Farmakovskaya M, Kamaletdinov N, Nazarenko T, Abubakirov A, Sukhikh G, Smitz JEJ. Improved maturation competence of ovarian tissue oocytes using a biphasic in vitro maturation system for patients with gynecological malignancy: a study on sibling oocytes. J Assist Reprod Genet. 2021 Jun; 38(6): 1331-1340. doi: 10.1007/s10815-021-02118-z. Epub 2021 Feb 22. PMID: 33619680; PMCID: PMC8266929.
• Kirillova A, Bunyaeva E, Van Ranst H, Khabas G, Farmakovskaya M, Kamaletdinov N, Nazarenko T, Abubakirov A, Sukhikh G, Smitz JEJ. Improved maturation competence of ovarian tissue oocytes using a biphasic in vitro maturation system for patients with gynecological malignancy: a study on sibling oocytes. J Assist Reprod Genet. 2021 Jun; 38(6): 1331-1340. doi: 10.1007/s10815-021-02118-z. Epub 2021 Feb 22. PMID: 33619680; PMCID: PMC8266929.
• Kirillova A, Kovalskaya E, Brovkina O, Ekimov A, Bunyaeva E, Gordiev M, Mishieva N, Nazarenko T, Abubakirov A, Sukikh G. Cryopreservation of euploid blastocysts obtained after fertilization of in vitro matured ovarian tissue oocytes: a case report. J Assist Reprod Genet. 2020 Apr; 37(4): 905-911. doi: 10.1007/s10815-020-01729-2. Epub 2020 Mar 24. PMID: 32206960; PMCID: PMC7183014.

#бесплодие #банкинг ооцитов #онкофертильность #IVM